人脂肪干細胞永生化細胞專(zhuān)用培養基傳代 

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內，打開(kāi)培養瓶瓶口，收集瓶?jì)鹊呐囵B基；

3) 向培養瓶?jì)燃尤?3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養瓶，使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jì)燃尤胂?1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養瓶?jì)燃尤?ml 含 10%FBS 的培養基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養基；

② 將消化下來(lái)的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右，輕拍培養瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個(gè)新的 T-25 培養瓶，各加入 4ml培養基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個(gè) T-25 培養瓶，每個(gè)培養瓶各 1ml；

9) 水平放置培養瓶，震蕩混勻后，將培養瓶置于 37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。